Практическая ВЭЖХ в аналитическом контроле

О школе

Цель школы ‒ дать молодым специалистам набор базовых прикладных знаний и навыков, позволяющих уверенно чувствовать себя при работе с ВЭЖХ: воспроизводить методики, видеть и решать возникающие в процессе работы проблемы, проводить оптимизацию ВЭЖХ-разделений.

Школа рассчитана на начинающих хроматографистов фармацевтических и химических предприятий.

Программа школы построена таким образом, что охватывает ключевые вопросы, встречающиеся в реальной практике хроматографистов: правильная постановка ВЭЖХ-задач и пробоподготовка, способы оптимизации разделений, особенности работы в ключевых хроматографических режимах (RP и HILIC, градиентная хроматография), организация правильной работы с хроматографом и подвижными фазами, диагностика состояния и консервация колонок, детектирование и чувствительность методик, обеспечение достоверности ВЭЖХ-анализа, стратегия поиска информации и готовых методик.

Школа прикладная ‒ это значит, что по каждому ключевому разделу слушатели своими руками выполняют практическую работу: воспроизводят и оптимизируют ВЭЖХ-методики в режимах RP и HILIC, повышают чувствительность методики, диагностируют состояние колонок, выявляют и устраняют неисправность хроматографа.

Программа

1 Введение в практическую ВЭЖХ

Задачи, решаемые ВЭЖХ на фармацевтическом производстве

1. Контроль качества субстанций (примеси, подлинность)
2. Контроль качества лекарственных препаратов (примеси, количественное определение, подлинность, однородность дозирования и др.)
3. Контроль смывов с оборудования
4. Исследование стабильности лекарственных средств
5. Задачи, для решения которых которых ВЭЖХ не подходит
6. Когда от ВЭЖХ лучше сразу отказаться?

Воспроизведение и оптимизация готовых методик

1. Воспроизведение готовых методик (входной контроль субстанции), замена колонки на аналогичную
2. Решение проблем с методикой ‒ оптимизация условий
3. Какие параметры методики можно менять?

Создание методик для новых препаратов

1. Есть «какая-то» методика: как понять, «хорошая» ли она? Дорабатывать эту методику или лучше разрабатывать новую?
2. Какой должна быть методика, чтобы за неё не было стыдно, и не пришлось переделывать?

Пробоподготовка для контроля качества лекарственных средств

1. Требования к пробе для ВЭЖХ
2. Растворители пробы. Влияние растворителя пробы на результат анализа
3. Когда растворитель пробы может ухудшить или улучшить разделение?
4. «Портит» ли ДМСО ВЭЖХ-колонки?
5. Растворение под действием ультразвука ‒ особенности метода. Как всё не испортить?
6. Как долго проводить растворение? Как понять, что времени достаточно?
7. Фильтрование пробы. Выбор оптимальных шприцевых фильтров
8. Пробоподготовка гелей, мазей, пластырей

2 Подходы к оптимизации ВЭЖХ-разделения

Оптимизация хроматографического разрешения R_S

1. Какое должно быть разрешение, как его регулировать?
2. Концепция «критических групп» пиков
3. Разрешение в равновесной хроматографии. “Полное” и “достаточное” разделение
4. Уравнение Снайдера – связь разрешения и ключевых хроматографических параметров
5. 5 способов увеличить разрешение в два раза

Хроматографическое удерживание k′

1. Как время анализа связано с разрешением?
2. Регулирование удерживания
3. Уменьшение удерживания: активная элюция, элюотропные ряды.
4. 5 способов увеличить удерживание
5. Как увеличить удерживание и одновременно уменьшить время анализа?

Оптимизация эффективности колонки N и времени анализа

1. Связь эффективности колонки и разрешения
2. Модель теоретических тарелок
3. Причины уширения пиков
4. Как получить максимальное число теоретических тарелок?
5. Как выбрать оптимальную скорость потока?
6. 5 способов увеличить эффективность
7. Как уменьшить время анализа в 3 раза, не ухудшая разрешение?

Асимметрия пиков

1. Виды и причины асимметрии.
2. Как корректно рассчитывать факторы асимметрии? Нормы по асимметрии.
3. Как асимметрия пика влияет на разрешение?

Хроматографическая селективность α

1. От чего зависит селективность?
2. Как температура колонки влияет на селективность?
3. Как регулировать селективность хроматографической системы?

3 Особенности работы в ключевых хроматографических режимах

Обращенно-фазовая хроматография (RP)

1. Сорбенты для реализации RP-режима. Практические отличия, особенности
2. Механизмы удерживания в RP-ВЭЖХ
3. Ион-парная хроматография
4. Чем отличаются разные С18-колонки? Как выбрать нужную? Как подобрать «аналогичную» колонку?
5. Растворители для RP-ВЭЖХ: критерии пригодности растворителей
6. Элюотропный ряд в RP-ВЭЖХ
7. Зависимость удерживания от pH подвижной фазы и pKa разделяемых веществ
8. 4 способа улучшить асимметрию пика

Градиентная хроматография

1. Решение «главных проблем» изократической хроматографии
2. Когда градиентное элюирование предпочтительно или необходимо?
3. Регулирование удерживания в градиентной хроматографии
4. Как выбрать длину колонки, скорость потока и профиль градиента?

Гидрофильная хроматография (HILIC)

1. Зачем нужен HILIC, если RP-ВЭЖХ позволяет решать бóльшую часть задач?
2. Реализация HILIC: как подобрать сорбент и состав подвижной фазы
3. Элюотропный ряд растворителей в HILIC. Стационарные фазы для HILIC

4 Организация правильной работы с ВЭЖХ

Правильная работа на хроматографе

1. Как понять, что хроматограф работает нормально?
2. Как избежать утечек, образования кристаллов и «закупоривания» капилляров?
3. Какие капилляры в каких случаях использовать: стальные или PEEK?
4. Как предотвратить «зацветание» жидкостных трактов?
5. Как продлить срок службы клапанов? Что делать, если клапан «пропускает»?
6. Как регулировать объем задержки градиентного смесителя?
7. Настройка автосамплера. Чем промывать иглу, какие виалы и крышки выбрать?
8. Что делать, если давление в системе сильно большое?
9. Что делать, если насос качает, а давления нет?
10. Какие поломки можно устранить самостоятельно?
11. В каких случаях нужно привлекать сервисного инженера?
12. Алгоритм поиска причин неполадок

Техника работы с подвижными фазами

1. На основе каких солей готовить подвижную фазу?
2. Какими кислотами/основаниями регулировать pH? Сколько соли добавлять?
3. Добавки в обращенно-фазовом режиме: метанол, ацетонитрил или тетрагидрофуран?
4. Приготовление подвижных фаз для HILIC
5. Подвижные фазы для ион-парной хроматографии – сколько гексансульфоната добавлять?
6. Способы дегазации подвижной фазы

Работа с хроматографическими колонками

1. Чем промывать колонку? Сколько уравновешивать? Как хранить колонку?
2. Чем отличаются «аналогичные» колонки между собой?
3. Что значат пометки SB, XB, XDB, AQ, Bio, BDS, Rx, PAH, AR, C18-1, C18-2 и др.?
4. Аналогичны ли Zorbax HILIC и Luna HILIC; Hypersil ODS-2 и Spherisorb ODS(2)?
5. 7 способов испортить колонку
6. Как увеличить срок службы колонки?
7. С какими веществами колонка совместима/несовместима?

Детектирование на ВЭЖХ

1. UV-детекторы – разновидности, особенности, различия
2. Как выбрать оптимальную длину волны детектирования?
3. Как правильно настроить UV-детектор?
4. Как часто нужно менять лампу? Как понять, что пора менять лампу?
5. Рефрактометрический детектор – настройка и правильная эксплуатация

5 Поиск информации о работе с ВЭЖХ

1. Где искать информацию по ВЭЖХ-разделениям? Где искать готовые методики?
2. Базы данных в помощь хроматографисту
3. Быстрый поиск по всем фармакопеям
4. Работа с научными статьями
5. Где найти УФ-спектр редкого вещества?

6 Подходы к обеспечению достоверности ВЭЖХ анализа

1. Какая требуется точность анализа? Неопределенность результата измерений
2. Стратегия обеспечения достоверности анализа:
   1. проверка выполнения критериев пригодности хроматографической системы
   2. оценка сходимости результатов анализа, полученных для двух независимых навесок
   3. валидация методики
   4. внедрение методик (верификация, участие в валидации)
   5. контроль качества результатов измерений
   6. трансфер (передача) методики между лабораториями, между аналитиками в одной лаборатории

Условия и бронирование

Даты: школа может быть проведена по запросу предприятия

Место поведения: г. Томск, Томский государственный университет

Продолжительность школы - 5 дней

Стоимость участия за 1 слушателя - 120 000 руб

Забронировать место

Есть вопросы?

Пишите на lpcma.tsu@gmail.com

Дмитрий Кургачев, зам. зав. ЛФХМА ТГУ